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冻存保种 

 随着转基因、基因敲除、基因敲入、人源化和其他基因修饰动物的大量制作和使用,保存这些重要的动物模型需要大量的人力、财力和空间投入。

  冷冻保存技术的出现,为科学研究者提供了不必花费昂贵代价维持动物模型核心种群的方法。冷冻保存技术还有其他许多优点,如可以避免珍贵的动物模型受到微生物污染;避免受到火灾、洪水和地震等自然灾害毁灭性的打击;更重要的是对于某些品系,可以防止伴随动物代数增加出现的基因停止或改变表达的风险。与活动物的国际运输相比,运输冻存的精子、胚胎或卵巢的成本和风险更低。

  目前,配子冻存以精子和胚胎为主,部分冻存卵巢或卵子,因为卵子解冻后复苏效率还比较低。维通达通过冻存精子,胚胎或卵巢组织,可以确保客户种质资源的安全。一旦客户需要使用冻存的种质资源,最快可以4~6周获得冷冻保存的动物资源。
服务内容和流程:

1)精子冻存

  精子冻存在保种服务中广泛应用,其优势在于技术成熟,成本低,容易操作等特点。通过无菌手术分离可育雄鼠的附睾,在特定的溶液进行精子的游离,采集边缘活力最好的精子,并加入专用的冷冻保护液,通过麦管冷冻保存在液氮中。

建议每个品系提供至少312周至4月龄的可育成年小鼠或大鼠,冻存20支麦管的精液。

2)胚胎冻存
  胚胎冻存是最早的和最安全的保存实验动物品系的方法。影响胚胎冷冻保存成功的三个重要方面包括:

  胚胎的数量;

  复苏后存活胚胎的数量;

胚胎移植后存活的成年动物数量。

   建议每个品系冻存约3002cell胚胎,每管20~30枚胚胎,放入液氮中保存。胚胎的来源,既可以通过超数排卵的方法,或者通过体外受精(IVF)的方法获得。当然,也可以与品系净化结合起来,这样可以节约胚胎准备的成本。

该技术的流程包括:
  胚胎采集。建议冻存2-cell胚胎。

  胚胎清洗。我们采用国际胚胎移植协会的建议方案进行清洗,目的是防止胚胎被微生物污染。
  胚胎冻存。采用玻璃化冷冻进行,经冻存液按照标准的程序处理后,投入液氮保存。
  复苏验证。冻存一周后,取出1支验证管的胚胎进行复苏,囊胚发育率大于50%,或胚胎移植后有小鼠出生,表明胚胎冷冻保存成功。
  长期保存。验证保存成功的品系,放入专用的胚胎保存液氮罐中长期保存。