维通达深耕于肝病研究领域二十余年，建立了在自主研发的可诱导肝损伤的免疫缺陷小鼠URG和NPG-Fah小鼠上移植原代人肝细胞（PHH）、培养扩增的人肝细胞以及诱导分化来的类肝细胞的技术，以手术方式结合一整套肝损伤诱导方案、围术期监护、检测分析手段等，获得人肝细胞替换率高达90%以上的人源化嵌合肝脏小鼠，可提供此类技术服务。除此之外，维通达建立了在自主研发的B6-Fah小鼠上移植同背景原代小鼠肝细胞或类肝细胞移植技术，可提供此类技术服务。维通达可提供的服务包括：

1. 原代或培养扩增的人肝细胞以及诱导分化来的类肝细胞移植

2. 鼠肝细胞移植

案例一：URG^®小鼠用于验证功能性肝细胞(EPS-Heps)在体内的再生能力^[1]

图1. URG^®小鼠移植EPS-Heps与PHHs 8周后人肝细胞重建情况

URG^®小鼠移植EPS-Heps 8周后，检测到人CYP3A4、CYP2C9、CYP1A2和CYP2C19与人ALB 共表达，同时血清中检测到人ALB的分泌。这些数据表明，EPS-Heps是具有功能成熟特征的类肝细胞，可以重建受损小鼠肝脏。

案例二：URG^®小鼠用于肝样细胞(HLC)移植治疗肝功能衰竭^[2]

图2. URG^®小鼠移植HLC后肝细胞再生

8 周龄雄性小鼠(n=5/group)在细胞移植前12小时通过腹腔注射15 mg/kg体重的强力霉素(Dox)，以PBS作为对照，把HLC、PHHs，经脾内移植到小鼠体内。细胞移植后URG^®小鼠持续饲喂含Dox饮用水6周。每周尾静脉取血，用ELISA法定量测定人ALB水平，第7周处死。结果表明：URG^®小鼠移植HLC后小鼠血清中人ALB分泌量逐渐增加，7周后血清ALT和AST浓度显著降低，人特异性ALU序列的实时PCR进一步证实了HLC在小鼠肝脏中的定植。同时检测到嵌合肝组织人类特异性基因ALB、人类肝细胞特异性代谢基因I期酶CYP1A2和CYP2A6等的表达。这些数据表明HLC可以整合到URG^®小鼠肝脏中，改善肝功能障碍。

案例三：URG^®小鼠用于体外转分化肝脏细胞功能的体内验证试验^[3]

图3. URG^®小鼠移植人诱导肝细胞(hiHeps)后肝细胞再生

URG^®小鼠脾内注射ES-Heps (n=16)、hiHeps (n=5)和 F-HEPs (n=6)。采集血样，ELISA法对人ALB进行定量，对肝脏切片染色及流式分析等操作。结果表明：URG^®小鼠移植hiHeps后小鼠血清中人白蛋白分泌量逐渐增加，移植6周后移植小鼠肝脏中观察到表达人ALB细胞簇。同时证实 hiHeps在体内的代谢功能，分析了CYP3A4、CYP2C9等表达。表明hiHeps在体内可稳定生长并具有功能。本研究说明URG^®小鼠可用于验证hiHeps作为肝细胞移植的潜在细胞来源。

维通达优势：

（1）URG^®小鼠的优点是，不诱导时uPA并不表达，小鼠健康生长；当用Dox诱导时，Tet-On系统驱动的uPA即在肝内表达，小鼠出现肝损伤，此时可接受外源肝细胞的植入。人源肝细胞移植可以在URG^®小鼠实现高达90%的整肝重建，且移植窗口期不受限制。

（2）相较于Fah敲除鼠，用URG^®鼠移植肝细胞，肝重建周期短(URG需6~9周，Fah KO鼠需3~6个月)，节约实验时间。相较于恒定表达uPA的小鼠，URG^®小鼠体重更大，成体雄鼠31±3 g，肝细胞移植手术后体重维持在25±3 g。因而肝重建成功的Hu-URG^®小鼠健康状态好，对实验操作的耐受力更好。

参考文献：

1. Wang Q, Sun D, Liang Z, et al. Generation of human hepatocytes from extended pluripotent stem cells. Cell Res. 2020, 30:810-813.

2. Li Z, Wu J, Wang L, et al. Generation of qualified clinical-grade functional hepatocytes from human embryonic stem cells in chemically defined conditions. Cell Death Dis. 2019, 10:763.

3. Du Y, Wang J, Jia J, et al. Human hepatocytes with drug metabolic function induced from fibroblasts by lineage reprogramming. Cell Stem Cell. 2014, 14:394-403.