(1)ES细胞打靶
ES细胞是全能胚胎干细胞,该细胞可以通过胚胎嵌合,获得ES细胞来源的小鼠。因此可以在ES上进行基因编辑,获得基因修饰小鼠。该方法在CRISPR等技术出现之前,是获得基因修饰小鼠的主要方法。
(2)EPS细胞打靶
EPS细胞是一种全能性比普通ES更高的干细胞。相比于普通ES具有种系传递能力强,打靶效率高的特点。它可以有效缩短基因修饰小鼠制备周期,降低制备费用。在制备基因敲入,条件敲除方面,效率显著高于CRISPR法,是一种新型高效的基因修饰小鼠制备策略。维通达拥有自主知识产权的EPS技术已成功应用于基因编辑小鼠快速制备中,2017年在cell上发表该项研究成果(Yang et al. 2017)。
图1. EPS制备基因修饰小鼠流程图
1. 技术流程:
载体构建→ 电转ES→ 克隆鉴定→ 嵌合鼠制备→ ES小鼠获得
2. 技术优势
-与CRISPR辅助技术相比,在制备基因敲入、条件敲除方面,周期短、结果可预测、效率显著高于CRISPR/Cas9法。
-与ES技术相比:ES打靶效率一般在百万分之一的级别,EPS基因打靶效率提高几十倍到上百倍。同时EPS因为更高的全能性,具有更强的种系传递能力,低至1颗EPS细胞,就可一步获得嵌合效率接近100%的ES小鼠,省去种系传递过程(三个月)。
-多次打靶:对于需要多次打靶的复杂动物模型,制备周期更短。
3. ES VS. EPS细胞打靶构建策略
图2. ES VS. EPS细胞打靶构建策略
4. 成功案例:
图3. 左图是ES打靶后获得的首建鼠;右图是EPS打靶后获得的首建鼠
参考文献:
1. Yang Y, Liu B, Xu J, et al. Derivation of Pluripotent Stem Cells with In Vivo Embryonic and Extraembryonic Potency. Cell. 2017, 169(2):243-257.e25.