基本信息

建模过程

对HBV-Tg小鼠腹腔注射CCL4，可以成功建立乙肝肝纤维化小鼠复合模型。使用0.5-0.7 μL/g体重的纯CCl4（溶解到橄榄油、玉米油或石蜡油），腹腔注射，每周2~3 次，连续4~8 周。HBV-Tg小鼠在联合CCl4注射8-12周后能够稳定成模。

由于小鼠肝脏具有强大的再生能力，且小鼠肝脏对CCL4有较好的耐受性，一般在注射后 3 天左右，CCL4代谢完以后，ALT 和 AST 即恢复或者接近正常水平。因而CCL4或者与HFD结合的治疗实验，需要考虑到肝损伤指标变化的特征，以及对照和治疗组的设置和取样分析等细节。

表型信息

1. CCL4注射后，小鼠外周血中ALT和AST水平变化

图1. HBV-Tg小鼠CCL4诱导血清ALT与AST水平

2. 12~16周时外周血中ALT与AST水平变化特征

图2. HBV-Tg小鼠CCL4诱导血清ALT与AST水平

HBV-Tg小鼠比野生C57小鼠更敏感，同样的CCL4诱导后，外周血中ALT和AST含量更高。

3. HE染色与天狼星红染色

图3. HBV-Tg小鼠CCL4诱导8周后肝组织HE染色，左侧为CCL4诱导组，右侧为对照组（注射玉米油）

图4. HBV-Tg小鼠CCL4诱导8周后肝组织天狼星染色图片

注：左侧为CCL4诱导组，右侧为对照组（注射玉米油），CCL4诱导8~10周，可以100%的出现纤维化和肝硬化特征（评分3分及以上，天狼猩红染色出现了桥接的特征）

HBV-Tg小鼠+CCL4研究实例

1. HBV-Tg小鼠CCL4诱导可用于肝纤维化模型[1]

图5. 小鼠血清乙肝病毒学检测

图6. 小鼠肝组织HBsAg、HBeAg免疫组化染色与半定量分析

图7. 肝组织病理HE、天狼猩红染色与胶原半定量分析

 C57BL/6N野生型小鼠随机分为野生型对照组(WT)、rAAV8-1.3HBV转染组(rAAV)、CCL4组(CCL4)、rAAV8-1.3HBV转染复合CCl4组(rAAV+CCL4)，将同周龄HBV-Tg小鼠随机分为HBV 转基因组(Tg)、HBV转基因复合CCl4组(Tg+CCL4)。每组小鼠各设5只。rAAV8-1. 3HBV转染采用尾静脉注射方式，实验首日注射1次，每只小鼠尾静脉注射病毒载量为1×10 v.g；CCL4以橄榄 油稀释至10%浓度，按照2 mL/kg小鼠体重腹腔注射造模，隔天1次。12周后麻醉处死鼠，留取血清与肝组织。 结果表明：Tg+CCL4组HBsAg、HBeAg含量显著增高，肝组织中HBsAg与 HBcAg均呈阳性，血清ALT、AST及肝组织Hyp含量均显著升高，Tg+CCL4组、炎症反应及胶原沉积明显增高。综上，HBV-Tg小鼠的纤维化进展明显。

HBV-Tg小鼠+CCL4小鼠应用领域

1. 为研究病毒和宿主因素影响HBV复制、疾病病理过程提供了稳定可靠的小动物模型

2. 研究抗HBV治疗药物，包括复制抑制剂、免疫治疗、基因治疗的 药理药效研究

3. 治疗肝纤维化研究

参考文献

1. 黄恺, 孙鑫, 赵志敏, 等. 两种乙肝肝纤维化小鼠复合模型的比较. 中国实验动物学报. 2019, 27(5):598-603.