保种服务是指，通过在液氮中保存实验动物的配子或胚胎，从而实现以较小的成本维持动物模型核心种群的方法。维通达通过冻存精子，胚胎或卵巢组织，需要时再复苏成活体动物，确保客户种质资源的安全。

1. 胚胎冻存

胚胎冻存是安全的保存实验动物品系的方法。影响胚胎冷冻保存成功的三个重要方面包括：①胚胎的数量；②复苏后存活胚胎的数量；③胚胎移植后存活的成年动物数量。

维通达建议客户每个品系冻存约200~300枚2cell、8cell或桑囊胚时期的胚胎，每管30枚左右，即8~10管胚胎放入液氮中保存。胚胎的来源，既可以通过超数排卵的方法，或者通过体外受精（IVF）的方法获得。当然，也可以与品系净化结合起来，这样可以节约获得足量数目胚胎的准备成本。

（1）胚胎冻存流程

①胚胎采集。维通达建议冻存2-cell胚胎。若2-cell胚胎复苏效果不佳，再考虑冻存8cell或桑囊胚时期的胚胎。

②胚胎清洗。我们采用国际胚胎移植协会的建议方案进行清洗，目的是防止胚胎被微生物感染。

③胚胎冻存。采用玻璃化冷冻进行，按照标准的流程经过冻存保护液处理后，投入液氮保存。

④复苏验证。冻存一周后，我们取出1支验证管的胚胎进行复苏，若胚胎存活率和囊胚发育率20~100%（野生型B6小鼠胚胎复苏率在80%以上，不同品系间存在差异），或胚胎移植后有健康小鼠出生，表明胚胎冷冻保存成功。若2-cell复苏存活率小于50%，我们会及时与客户沟通，更改为8-cell或桑囊胚期胚胎冻存。

⑤长期保存。验证保存成功的品系，放入专用的胚胎保存液氮罐中（一般分布于2个液氮罐），长期保存。

2. 精子冻存

精子冻存，在保种服务中广泛应用，其优势在于技术成熟，成本低，容易操作等特点。通过无菌手术分离可育雄鼠的附睾，在特定的溶液进行精子的游离，并加入专用的冷冻保护液，通过麦管冷冻保存在液氮中。

建议客户每个品系提供2~3只12周至4月龄的可育成年小鼠，冻存15~20支麦管的精液。

3. 品系恢复

在基因修饰动物模型的使用过程中，由于各种原因造成该品系的繁育出现障碍，如由于老龄化造成精子活力的降低，或由于疾病或意外造成繁育期动物生命垂危，这时可以通过维通达提供胚胎复苏、精子复苏，或者辅助生殖技术进行动物品系的恢复。

（1）胚胎复苏

冻存的胚胎按照标准程序复苏后，移植到代孕大小鼠的输卵管或子宫内，得到活体后代的过程。

（2）精子复苏

体外受精是指将成熟的卵子和获能的精子在体外进行受精的过程。维通达有丰富的作体外受精的经验，建议精子活力大于30%时，直接采用体外受精方法复苏后代。

（3）辅助透明带切开体外受精

辅助透明带切开是指获得的精子活力小于30%时，精子不能顺利穿过透明带，采用传统的方法不能得到受精卵时，对卵母细胞的透明带进行打孔或切开，从而获得受精卵的方法。维通达可以采用Xyclone激光破膜仪进行透明带打孔，或者用专用的尖针将透明带切开，两种方法均可得到较高的受精率。

案例一：品系保存方法的选择

案例二：胚胎和精子冻存说明