基本信息

品系建立

维通达构建了包含人 HRAS 基因的编码序列和内含子、上下游非编码区的染色体 DNA 片段（全长约为 7.5 Kb，并将其最后一个内含子的序列定点突变为可增强基因表达的序列，使其可以在 HRAS 自身调控序列的驱动下表达），并将其注射到C57BL/6小鼠的原核内。获得阳性 founder 鼠分别扩繁建系，从中筛选转基因整合于小鼠6号染色体，且转基因拷贝数为4的第9个系（命名为 rasH9）。利用western blot检测表达，结果表明 HRAS 在小鼠多脏器表达。试验证明，RasH9转基因鼠也可用于药物致瘤性评估实验。

图1. RasH9小鼠构建策略示意图 

图2. Western blot 检测RasH9小鼠各脏器表达情况

基因型鉴定信息

图3. RasH9小鼠基因检测

表型信息

致癌性实验评价方案：

试验组单次腹腔注射给予75 mg/kg的MNU，给药当天为D1。全程记录生长状况，并于实验结束时对所有动物均进行系统解剖和大体观察。解剖时的检查包括体表观察、所有的大体病变组织与肿瘤发生情况。

1. 致癌性评价试验各组小鼠体重变化

图4. 致癌性评价试验各组小鼠体重变化

注：图中CON与75 mg/kg MNU组为RasH9小鼠；CON-A与75 mg/kg MNU-A组为同类小鼠

结果表明：与对照组相比，RasH9雄鼠在给药MNU 126日龄后体重下降，雌鼠在154日龄后显著上升。与背景数据比较：

阴性对照组：与阴性对照的同类小鼠背景数据相比，本试验的RasH9小鼠体重增长较快，从D7开始之后雌雄RasH9小鼠的平均体重均超过了同类小鼠；

MNU组：与同类小鼠75 mg/kg MNU的背景数据相比，本试验的RasH9小鼠体重增长较快，从D7开始之后雌雄RasH9小鼠的平均体重均超过了同类小鼠。

2. 致癌性评价试验各组RasH9小鼠生存率

图5.  致癌性评价试验各组雌性生存曲线

注：左图为雄性，右图为雌性

结果表明：与对照组相比，雄性RasH9小鼠在93天开始出现死亡，171天时，终末生存率为46.7%；雌性RasH9小鼠在第96天开始出现死亡，178天时，终末生存率约为26.67%。

3. 致癌性评价试验各组RasH9小鼠肿瘤发生情况

MNU处理RasH9小鼠肿瘤发生情况

NA=不适用或未见文献报道；

*包括胸腺、脾脏、淋巴结起源于造血系统的淋巴瘤。

在本试验条件下，RasH9 小鼠单次腹腔注射给予 75 mg/kg 的 MNU，与同类小鼠文献报道。以及本实验室背景值相比主要发生肿瘤种类和发生率基本一致。

4. 致癌性评价试验各组RasH9小鼠肿瘤发生情况

5. 致癌性评价试验组RasH9小鼠组织病理学

图6. 致癌性评价试验MUN组RasH9小鼠组织病理学

参考文献

1. Madhav G,  et  al.  Historical  control  data  of  spontaneous  tumors  in  transgenic CByB6F1-Tg(HRAS)2Jic(Tg.rasH2) mice. International Journal of Toxicology, 32: 48-57, 2013.

2. Nambiar  P.  R,  et  al.  The  rasH2  mouse  model  for  assessing  carcinogenic  potential  of pharmaceuticals. Toxicologic pathology, 41: 1058-1067, 2013.

3. Masaya  T,  et  al.  Interlaboratory  comparison  of  short-term  carcinogenicity  studies  using CB6F1-rasH2 transgenic mice. Toxicologic Pathology, 31: 191-199, 2003.

4. Prashant R, et al. Spontaneous tumour incidence in rasH2 mice: review of internal data and published literature. Toxicologic pathology, 40: 614-623, 2012.

5. Mansell  K,  et  al.  Evaluation  of  background  data  from  rasH2  mice  used  in  26-week carcinogenicity. Charles River laboratiries preclinical services, 2013.