基本信息

品系建立

将人CD3E基因CDS序列及小鼠CD3E基因promotor和enhancer序列组成的构件DNA的线性化片段注入C57BL/6NCrl小鼠胚胎原核，获得转基因阳性小鼠。通过表型分析，选择表达量适宜的hCD3E转基因阳性鼠作为首建鼠，与野生型C57BL/6NCrl交配扩繁建立。CD3E基因编码的蛋白质是CD3-epsilon多肽，与CD3-gamma、-delta和-zeta以及T细胞受体alpha/beta或gamma/delta异二聚体共同构成T细胞受体- cd3复合体，是T细胞接受抗原刺激活化的信号转导分子。

该hCD3E小鼠品系保留了鼠源CD3复合体各亚基（CD3εδγ）基因的表达，同时在小鼠正常发育的T细胞上表达生理水平的hCD3E。hCD3E可以随机掺入小鼠T细胞的CD3复合体分子中，发挥正常信号转导功能，并可被hCD3E特异性抗体结合并激活CD3分子介导的T细胞活化信号。CD3E人源化小鼠可用于验证针对hCD3E和肿瘤抗原的双特异性抗体（bispecific antibody）的抗肿瘤效果。

表型信息

1. 外周血hCD3E检测

图1. FACS检测hCD3E小鼠外周血表达hCD3E; 注：左侧为C57BL/6N小鼠，右侧为hCD3E小鼠; 

外周血流式分析可以检测到hCD3E的表达，野生型C57BL/6N小鼠不表达hCD3E，hCD3E小鼠检测到90%的mCD3⁺阳性T细胞表达hCD3E。

2. 流式分析hCD3E小鼠外周血中B、CD4⁺ T、CD8⁺ T和NK细胞的含量

图2. FACS检测hCD3E小鼠外周血中B、CD4⁺ T、CD8⁺ T和NK细胞的含量,结果可知hCD3E小鼠可正常进行B、T和NK细胞的分化

3. 流式分析分别使用小鼠和人CD3E抗体处理hCD3E小鼠（野生型C57BL/6为对照）免疫细胞

图3. 流式分析分别使用小鼠和人CD3E抗体处理hCD3E小鼠（野生型C57BL/6为对照）免疫细胞

结果可见，人CD3E抗体处理，在hCD3E/Vst小鼠中可以有效地活化T细胞，野生型C57BL/6小鼠只有抗小鼠的CD3E抗体才能有效激活T细胞。

应用案例

1. 构建结肠癌模型及药效实验

图4. hCD3E小鼠构建CT26-TAA结肠癌模型及Keytruda药效试验

用BALB/c × C57BL/6 F1代hCD3E小鼠皮下接种BALB/c小鼠来源的结肠癌细胞系CT26-TAA，肿瘤体积接近100±50 mm³时进行分组（n=7），注射5种不同类型的CD3E双特异性抗体药物CS4、Y6、Y7、M-1和M-K，每周2次，连续3周。结果表明：1~2mg/kg hCD3e双特异性抗体CS4、Y6和Y7能够显著抑制肿瘤生长。证明hCD3E/小鼠可有效评估双特异性抗体体内药效。

hCD3E小鼠应用领域

1. 验证针对hCD3E和肿瘤抗原的双特异性抗体（bispecific antibody）的抗肿瘤效果

2. T细胞发育和活化的研究

3. I型糖尿病（autoimmune diabetes）发病机理和治疗研究

参考文献

1. Clevers HC, Dunlap S, Wileman TE, et al. Human CD3-epsilon gene contains three miniexons and is transcribed from a non-TATA promoter. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1988, 85(21): 8156–8160.

2. J Autoimmun. Mucosal administration of CD3-specific monoclonal antibody inhibits diabetes in NOD mice and in a preclinical mouse model transgenic for the CD3 epsilon chain. 2017, 115-122.

3. Ueda, Otoya, et al. "Entire CD3ε, δ, and γ humanized mouse to evaluate human CD3–mediated therapeutics." Scientific Reports7 (2017).